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丝袜 内射 干货共享｜2A肽在病毒学磋磨中的应用
发布日期：2024-08-24 04:46 点击次数：190
什么是2A肽：丝袜 内射
2A肽是开端于病毒的短肽，一般为18至25个氨基酸，也被称为“自我剪切”肽。
2A肽功能：
2A肽大概使一条转录产品产生多种卵白，即使交融卵白通过2A肽自我切割分离，产生多种卵白质独只怕期骗各自的功能。2A肽大概结束多基因共抒发、卵白质分离抒发、卵白质功能归附，况兼在抗体制备和病毒学磋磨中具有病笃意象。
2A肽作用机制：
2A肽介导的自我剪切机制是核糖体在2A肽翻译流程中跳过C端酿成的甘氨酰-脯氨酰（GP）肽键。
2A肽有哪些：
现在常用的2A肽有4种：P2A、T2A、E2A和F2A。
1. P2A，开端于猪捷申病毒（porcine teschovirus），氨基酸序列为：（GSG）ATNFSLLKQAGDVEENPGP
2. T2A，开端于明脉扁刺蛾病毒（Thosea asigna virus），氨基酸序列为：（GSG）EGRGSLLTCGDVEENPGP
3. E2A，开端于马甲型鼻炎病毒（Equine rhinitis A virus），氨基酸序列为：（GSG）QCTNYALLKLAGDVESNPGP
4. F2A，开端于手足口病病毒（Foot and mouse disease virus），氨基酸序列为：（GSG）VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
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图1：4种常用的2A肽氨基酸序列
相通来说，在使用单个2A肽的情况下，P2A的切割效果最高，险些不错达到100%。其次是T2A，再次是E2A和F2A，F2A的切割效果一般为50%傍边。关联词，在串联使用多个2A肽的情况下，还不行疏忽地以为将多个P2A或T2A串联起来就能达到最大的切割效果，这需要实验来考据。
另外，夏威夷大学马诺阿分校的Wei Wen Su等东谈主发现了两种开端于紫海胆（紫胆）和加利福尼亚海虫（加利福尼亚海兔）的2A肽，分辩定名为SP2A和AC2A。这是科学家们初次发现的非病毒开端的2A肽。
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图2：SP2A和AC2A氨基酸序列
近日，来自耶鲁大学的Yuan Ren等东谈主进展了来自马乙型鼻炎病毒（Equine rhinitis B virus 1，ERBV-1）的2A肽切割效果也不错达到70-99%。
2A肽在真核抒发载体构建中的应用案例：
Jin Hee Kim等东谈主将NLS-EGFP-2A-mCherry-CAAX串联抒发，通过WB和免疫荧光考据了4种不同2A肽的切割效果。为止标明：切割效果：P2A＞T2A＞E2A＞F2A。免疫荧光为止为止标明，P2A大概很好地将EGFP和mCherry在空间上分离开来，因为EGFP交融了NLS，因此定位在细胞核内，而mCherry的C终局添加了CAAX异戊二烯化基序，因此大概定位在细胞质膜上。作家进一步考据了2A肽在东谈主源，鼠源和斑马鱼细胞系上的切割效果，其为止一致。
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图3：真核载体构建默示图
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图4：P2A在HEK293T细胞中的切割效果最高
2A肽在病毒学磋磨中的应用案例1-GFP叙述流感病毒的构建：
Balaji Manicassamy等东谈主将流感病毒NS1和GFP交融抒发，在GFP的C终局添加P2A肽，从而将NS1-GFP和NEP卵白分离开来。用次法式他们到手构建了NS1-GFP交融抒发的重组病毒。该法构建的叙述病毒对小鼠的致病性有所镌汰，因此在设立小鼠感染模子时，需要普及攻毒剂量。该放构建的GFP叙述病毒大概应用于小鼠活体病毒成像和抗病毒药效评价。
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图5：佩带GFP叙述基因的重组流感病毒的构建
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图6：NS1-GFP病毒的体内特色
2A肽在病毒学磋磨中的应用案例2-蓝耳病毒DNA疫苗的构建：
Sochanwattey Meas等东谈主将蓝耳病毒的GP5、M和N基因串联抒发，中间用P2A和F2A组合的口头将不同的产品分离开来。用此法式构建的抒发载体大概到手地同期抒发GP5、M和N三个卵白。2A肽的应用为DNA疫苗的构建提供了新的想路。
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图7：三顺反子基因构建默示图
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图8： GP5、M和N卵白抒发
海外呦呦参考文件
1. High Cleavage Efficiency of a 2A Peptide Derived from Porcine Teschovirus-1 in Human Cell Lines, Zebrafish and Mice
2. Analysis of in vivo dynamics of influenza virus infection in mice using a GFP reporter virus
3. Production of an antibody Fab fragment using 2A peptide in insect cells
4. Non-viral 2A-like sequences for protein coexpression
5. Co-expression of self-cleaved multiple proteins derived from Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus by bi-cistronic and tri-cistronic DNA vaccines
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